飼養(yǎng)細(xì)胞的方法
飼養(yǎng)細(xì)胞的方法
在體外的細(xì)胞培養(yǎng)中，單個的或數(shù)量很少的細(xì)胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細(xì)胞才能使其生長繁殖，加入的細(xì)胞稱之為飼養(yǎng)細(xì)胞。下面是學(xué)習(xí)啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)細(xì)胞的方法，一起來看看。
飼養(yǎng)細(xì)胞的方法
嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。
不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套。
有可能的話在拿到新細(xì)胞的時候做好支原體衣原體檢測。
水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進(jìn)去)。
晚上離開的時候最好給細(xì)胞房照紫外，超凈臺是用完就開吧。
最好的是同一時間就你一個人在用細(xì)胞房在養(yǎng)細(xì)胞。
飼養(yǎng)細(xì)胞的制備
小鼠腹腔細(xì)胞含有巨噬細(xì)胞，除具有飼養(yǎng)作用外，還可清除死亡破碎細(xì)胞及微生物。取8～10周齡同系小鼠，斷頸處死后，無菌操作腹腔內(nèi)注射10～15ml完全培養(yǎng)液，用消毒拇指輕揉腹部數(shù)次后， 吸回腹腔液體，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml。 一般一只小鼠腹腔液可獲取細(xì)胞3～5×106，可供一次融合用。亦可取兩只小鼠腹腔巨噬細(xì)胞混合使用。此外，同系小鼠脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞亦可作為飼養(yǎng)細(xì)胞。
選擇性培養(yǎng) 兩種親本細(xì)胞經(jīng)PEG處理后，可形成多種細(xì)胞成分的混合體，包括未融合的游離親本細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞間的融合、免疫B細(xì)胞間的融合以及骨髓瘤細(xì)胞與免疫B細(xì)胞間融合的異核細(xì)胞，僅后者可形成雜交瘤，應(yīng)予以篩選出來克隆培養(yǎng)。通常應(yīng)用HAT培養(yǎng)液，其中含有次黃嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。
大多數(shù)實驗室在融合當(dāng)天就加入HAT培養(yǎng)液，也可次日加入。一般在融合后7～14天內(nèi)使用HAT培養(yǎng)液，然后改用HT培養(yǎng)液。融合后第2～3周進(jìn)行換液，每次吸出培養(yǎng)孔舊液1/2換入新液，以后視克隆生長情況3～5天換液1次，連續(xù)2周。3～5天后未融合及自身融合的細(xì)胞逐漸死亡，1周左右可出現(xiàn)克隆，并不斷增殖，當(dāng)集落>3mm或布滿孔底1/2時即可取上清作抗體活性檢測，同時補(bǔ)加新鮮HT培養(yǎng)液。在一次較好的融合試驗中，約70～80%孔有克隆生長。所有生長克隆的孔都需要取培養(yǎng)上清液進(jìn)行抗體活性檢測。培養(yǎng)3周后即可改用普通完全培養(yǎng)液。
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