E花環(huán)形成的原理是什么
E花環(huán)形成的原理是什么
E花環(huán)你聽說過嗎?是不是以為是什么新型的花環(huán)編織方法?E花環(huán)是一種花環(huán)形成細(xì)胞，它的實(shí)驗(yàn)是一種體外檢測(cè)人和動(dòng)物細(xì)胞免疫功能的方法，常用于T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。你對(duì)E花環(huán)知道多少?下面由學(xué)習(xí)啦小編為你詳細(xì)介紹。
E花環(huán)形成的原理：
T淋巴細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞(SRBC)的受體(CD2)，存在于95%成熟T淋巴細(xì)胞表面，能與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合，經(jīng)染色后，可見紅色的綿羊紅細(xì)胞與中央的藍(lán)色淋巴細(xì)胞組成玫瑰花瓣?duì)?，形成花環(huán)樣，稱為E花環(huán)。凡表面粘附有3個(gè)或3個(gè)以上綿羊紅細(xì)胞(SRBC)者為花環(huán)形成細(xì)胞(即E陽性細(xì)胞)。
E花環(huán)實(shí)驗(yàn)原理：
免疫學(xué)上用來檢測(cè)T細(xì)胞數(shù)量的一種實(shí)驗(yàn)方法，T細(xì)胞表面具有能與綿羊紅細(xì)胞(SRBC)表面糖肽結(jié)合的受體，稱為E受體(CD2)。CD2 是一種糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量為30 000～60 000，已證實(shí)E受體是人類T細(xì)胞所特有的表面標(biāo)志。當(dāng)T細(xì)胞與SRBC混合后，SRBC便粘附于T細(xì)胞表面，呈現(xiàn)花環(huán)狀。通過花環(huán)形成檢查T細(xì)胞的方法，稱為E花環(huán)形成試驗(yàn)。根據(jù)花環(huán)形成的多少，可測(cè)知T細(xì)胞的數(shù)目，從而間接了解機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，判斷疾病的預(yù)后，考核藥物療效等。
實(shí)驗(yàn)操作方法：
1.用分層液密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，計(jì)數(shù)后，用Hanks液配成107個(gè)/ml細(xì)胞懸液。
2.取0.1 ml淋巴細(xì)胞懸液，加入0.1 ml 1% SRBC及0.05 ml滅活小牛血清，混勻。
3.37℃靜置5分鐘，500 rpm低速離心5min后，放入冰箱，2小時(shí)或過夜。
4.取出試管，吸棄上清液，加0.8%戊二醛溶液1 滴，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，置4℃冰箱固定15分鐘。
5.取出后，輕輕旋轉(zhuǎn)試管，使沉淀細(xì)胞重新懸浮;取1滴涂片，自然干燥后，瑞氏染色，高倍下觀察。
凡能結(jié)合3個(gè)SRBC者即為E花環(huán)陽性細(xì)胞。計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，算出花環(huán)形成細(xì)胞百分率。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1.SRBC最好是新鮮的，一般采血后保存在Alsever保存液中，2周內(nèi)可以用，超過2周SRBC與淋巴細(xì)胞的結(jié)合能力下降。
2.從采血到測(cè)定，不得超過4小時(shí)，若用分離的淋巴細(xì)胞，放置時(shí)間也不得超過4小時(shí)，否則SRBC受體會(huì)自行脫落。同時(shí)用錐蟲藍(lán)檢查活力，活細(xì)胞不少于95%。
3.計(jì)數(shù)前應(yīng)將沉于管底的細(xì)胞予以重懸，但只宜輕緩旋轉(zhuǎn)試管，使細(xì)胞團(tuán)塊松開即可，不能過猛或強(qiáng)力吹打，否則花環(huán)會(huì)消失或減少。
4.要求全部試驗(yàn)在室溫(16～23℃)中進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)材料：
1.肝素抗凝血2 ml。
2.聚蔗糖-泛影葡胺分層液。
3.pH7.2～7.4 Hanks液。
4.瑞氏染色液。
5.0.8%戊二醛溶液(用Hanks液將戊二醛配成0.8%，然后用1 mol/L NaOH將pH調(diào)至7.2～7.4)。
6.吸收滅活的小牛血清(小牛血清經(jīng)56℃ 30分鐘滅活后，取1體積壓積SRBC，加2體積滅活小牛血清，混勻后置37℃ 30分鐘，離心沉淀紅細(xì)胞，吸取上清，放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。
7.1% SRBC懸液(無菌脫纖維的綿羊靜脈血100 ml加Alsever保存液50 ml，置4℃冰箱保存，一般不宜超過2周。用前以Hanks液洗3次，1 500轉(zhuǎn)/分 10分鐘，棄上清，將壓積紅細(xì)胞用Hanks液配成1 %SRBC懸液，細(xì)胞濃度約為8×107個(gè)/ml)。
E花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)臨床意義：
E花環(huán)值增高
見于甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺炎、重癥肌無力、慢性活動(dòng)性或遷延性肝炎、sle活動(dòng)期以及器官移植排斥反應(yīng)等。
E花環(huán)值減低
見于免疫缺陷性疾病，如惡性腫瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面積燒傷、多發(fā)性神經(jīng)炎、淋巴增值性疾病。